R ecovery

1. Vyberte zmrznutú skúmavku z tekutého dusíka a ihneď ju vložte do vodného kúpeľa s teplotou 37 °C za mierneho pretrepávania. Po roztopení tekutiny (asi 1-1,5 minúty) vyberte trochu alkoholu a položte ho na ultra čistý pracovný stôl.

2. Bunkovú suspenziu odoberte do 15 ml centrifugačnej skúmavky s 10 ml média (umyte zmrazenú skúmavku médiom a umyte všetky bunky prilepené na stene) a centrifugujte pri 1000 °C 5 minút.

3. Supernatant sa obrátil a pridal sa 1 ml média na suspendovanie buniek. Zaúdite do 10 cm misky s 10 ml média a jemne pretrepte doľava a doprava, aby sa bunky v miske rovnomerne rozdelili.

4. Označte typ bunky a dátum, meno človeka atď., vložte ju do CO2 inkubátora, prilepte bunky a vymeňte médium.

5. Médium sa vymieňalo raz za 3 dni.

P assáž

1. Rastliny boli pasážované, aby sa dosiahlo 80-90% pokrytie.

2. Abup pôvodné médium .

3. Pridajte vhodný trypsín (len zakryte bunky) a trávte 1-2 minúty .

4. Štiepenie sa ukončilo pridaním rovnakého objemu média obsahujúceho sérum .

5. Prefúknite bunky pomocou pipety a nechajte ich všetky zavesené.

6. Bunky boli odsaté do 15 ml centrifugačnej skúmavky a centrifugované pri 1000 °C počas 5 minút.

7. Nalejte supernatant a pridajte 1-2 ml média, aby ste rozfúkali všetky bunky.

8. Bunky boli prenesené do niekoľkých kultivačných misiek v závislosti od druhu buniek. Vo všeobecnosti sú rakovinové bunky rozdelené na 5 buniek a prenášajú sa tri normálne bunky. Pokračujte v pestovaní.

Voľne na strávenie buniek a ich odstredenie (ibid. vyššie).

Bunky suspendujte v zodpovedajúcom zmrazenom skladovacom roztoku, rozdeľte ich do sterilizovanej mraziacej skúmavky, nechajte niekoľko minút odpočívať a špecifikujte typ buniek a dátum skladovania zmrazeného stavu. potom sa uchováva v perfúzii kvapalným dusíkom.

Príprava kryokonzervačného roztoku: 70 % médium 20 % FBS 10 % DMSO. DMSO sa má pridávať pomaly a stále sa pretrepávať.