Ako pomocný materiál v detekčných experimentoch ELISA, Enzým tanier zohráva rozhodujúcu úlohu a priamo ovplyvňuje konečné experimentálne výsledky. Kvalita Enzýmová platňa závisí najmä od jeho citlivosti na adsorpciu bielkovín, rozdielu v adsorpčnej kapacite bielkovín medzi platňami a otvormi a rozdielu medzi šaržami zakúpených enzýmová platňa . Preto výber an enzýmová platňa produkt s vysokou citlivosťou na adsorpciu bielkovín, malý rozdiel medzi dierami v adsorpčnej kapacite bielkovín a malý rozdiel medzi šaržami je pre experimentátora zárukou získania spoľahlivých a stabilných experimentálnych výsledkov.

Enzýmová platňa klasifikácia: podľa rôznych klasifikačných noriem, tanier má rôzne klasifikácie.

1: Podľa počtu dier sa dá rozdeliť na 96 dier, 48 dier atď enzýmová platňa sa používa hlavne s čítačkou mikrodoštičiek, tanier meter na trhu je najviac 96 otvorov, takže mikroplatnička má 96 otvorov.

2: Podľa rôznych dna sa delí na ploché dno, U dno, V dno atď.

Index lomu plochej základne je nízky, čo je vhodné na detekciu v mikroplatni;

T Index lomu mikrodoštičky U je vysoký, vhodný na odber vzoriek, odber vzoriek a miešanie a môže priamo pozorovať zmenu farby bez toho, aby ju umiestnil na mikroplatničku, aby sa zistilo, či existuje zodpovedajúca imunitná reakcia.

Mikroplatnička V základne dokáže presne absorbovať vzorku.

3: Podľa rôznych väzbových schopností mikrodoštičky a proteínových a iných molekúl sa delí na vysokú väzbovú silu, strednú väzbovú silu a amináciu.

(1) Vysoká väzbová sila

Po povrchu tejto mikroplatničky sa jej schopnosť viazať proteíny výrazne zvýši, až na 300~400 ng IgG/cm2 a molekulová hmotnosť hlavného viazaného proteínu je > 10 kD. Použitie tejto triedy mikrotitračných doštičiek môže zlepšiť citlivosť a môže relatívne znížiť koncentráciu a množstvo potiahnutého proteínu, čím je jednoduchšie vyvolať nešpecifické reakcie. Po potiahnutí antigénom alebo protilátkou nemôže neiónový detergent účinne utesniť miesto nenaviazaného proteínu a proteín by sa mal použiť ako tesniaci prostriedok.

(2) Stredná väzbová sila

Takéto mikrodoštičkové doštičky sa pasívne viažu na proteín prostredníctvom hydrofóbnych väzieb na povrchu a sú vhodné ako nosiče tuhej fázy pre makromolekulárne proteíny s molekulovou hmotnosťou > 20 kD, s väzbovou kapacitou proteínu 200 až 300 ng IgG/cm2. Vďaka vlastnostiam jeho jedinej väzby na makromolekuly je vhodný pre nosiče na pevnej fáze ako nepurifikované protilátky alebo antigény, aby sa znížila možnosť nešpecifickej krížovej reaktivity. Platňa môže byť inertný proteín alebo neiónový detergent ako tesniaci roztok.

(3) Aminácia

Táto mikroplatnička má po povrchovej úprave kladne nabitú aminoskupinu, ktorej hydrofóbna väzba je nahradená hydrofilnou väzbou. Táto trieda mikrodoštičiek je vhodná ako nosič tuhej fázy pre proteíny s malou molekulou. Pomocou vhodného pufra a pH sa povrch viaže na negatívne nabité malé molekuly prostredníctvom iónových väzieb. Vďaka hydrofilným vlastnostiam jej povrchu a schopnosti kovalentne sa viazať inými sieťovadlami je možné ju použiť na fixáciu proteínových molekúl rozpustných v dekontaminačných prostriedkoch ako Triton-100, Tween 20 atď. kvôli zníženej hydrofóbnosti; okrem toho je potrebné povrch účinne uzavrieť. Kvôli hydrofilným a kovalentným povrchovým vlastnostiam musí byť použitý tesniaci roztok schopný interagovať s akoukoľvek funkčnou skupinou v nereaktívnej aminoskupine a vybranom zosieťovacom prostriedku.

4. Podľa farby sa dajú rozdeliť na priehľadné, čierne a biele.

Transparent sa najčastejšie používa na najvšeobecnejšie experimenty s imunizáciou viazanou na enzým. V Relcontrast k priehľadnej mikrodoštičke sú tiež nepriehľadné mikrodoštičky na svetelnú detekciu, zvyčajne čiernobiele. Čierna mikrodoštička samotná má absorpciu svetla, takže jej signál je oveľa nižší ako biela mikrodoštička, preto sa všeobecne používa na detekciu silného svetla, ako je fluorescenčná detekcia. Biela mikroplatnička sa používa na detekciu slabého svetla, často sa používa na všeobecnú chemiluminiscenciu. Čierna mikroplatnička môže navyše oslabiť aj problém nešpecifických reakcií. Zároveň je dôležité poznamenať, že pri všeobecnej mikrodoštičke nemôže byť svetelná detekcia, pretože svetlo vyžarované z chemiluminiscenčnej reakcie je izotropné, ak sa pri priehľadnej mikrodoštičke nebude svetlo šíriť len z vertikálneho smeru, ale aj z horizontálneho smeru, aby svetlo ľahko cez medzeru medzi otvorom a stenou otvoru, čo má za následok svetlo hodnoty absorpcie svetla otvoru je ovplyvnená susedným otvorom emitované svetlo.

Dobrá mikroplatnička by mala mať dobrý adsorpčný výkon, nízku hodnotu slepého pokusu, vysokú priehľadnosť dna otvoru a podobný výkon medzi platňami a medzi otvormi tej istej platne. V dôsledku rozdielu v surovinách a rozdielu vo výrobnom procese je kvalita rôznych produktov veľmi odlišná, preto je potrebné pred použitím skontrolovať výkon každej šarže mikrodoštičky. Bežne používané metódy kontroly sú určitá koncentrácia ľudského IgG (všeobecne 10 ng/ml) potiahnutých jamkami platne ELISA, po premytí, pridaním vhodného riedenia enzýmom značenej anti-ľudskej IgG protilátky do každej jamky, premytím po tepelnej konzervácii, pridaním farby substrátu, zastavte enzymatickú reakciu a zmerajte absorbanciu roztoku v každej jamke. Reakčné podmienky boli kontrolované tak, že odčítanie každej jamky bolo udržiavané na absorbancii okolo 0,8. Vypočítal sa priemer celkových hodnôt. Rozdiel medzi priemerom všetkých jednotlivých odčítaní a všetkých odčítaní musí byť menší ako 10 %. Nasledujúce tri mikrodoštičky sú A, B a C ako príklad.

Priama metóda: detekcia adsorpcie ľudského IgG na povrchu mikroplatničky

Sendvičová metóda s dvojitou protilátkou: antigén v sére pozitívny na anti-ľudské protilátky

Ako je možné vidieť z vyššie uvedeného obrázku, v týchto troch typoch bioenzýmových doštičiek má mikroplatnička triedy A lepší účinok na adsorpciu proteínov, ale tiež zlepšuje citlivosť adsorpcie proteínov, čo môže poskytnúť spoľahlivejšie experimentálne údaje. Okrem toho sa môžete opýtať na tanier rozdielu šarže. Nasleduje rozdiel šarží určitého taniera. Ako je možné vidieť z grafu údajov rozdielu v rámci šarže, mikrodoštička má dobrú stabilitu medzi šaržami a rozdiel koeficientu variácie (CV) v rámci šarže je okolo 5,0 %, čo je výrazne nižšie ako koeficient variácie v rámci šarže. pod 10,0 % v štandarde kontroly kvality pre klinickú imunitnú reakciu. Preto je vhodný aj pre experimenty ELISA.